Giardia analýza: typy, jak připravit a vzít, dekódování

Krevní test na celkové protilátky proti lamblie (IgG/IgM) (titr)

Imunologický krevní test, při jehož provádění určí celkový titr specifických protilátek izotypu G a M (IgG/IgM) proti antigenům střevní lamblie, se provádí za účelem diagnostiky parazitární invaze a sledování úspěšnosti její léčby.

giardiasis je časté infekční onemocnění, jehož rozvoj je způsoben poškozením jater a tenkého střeva jednobuněčným parazitem Giardia lamblia. K infekci dochází potravou a kontaktem. Giardia mají schopnost existovat ve dvou formách:

1. Vegetativní, pro které je charakteristická jejich lokalizace v horní části tenkého střeva.
2. Spory – paraziti pronikají do tlustého střeva a jsou v „konzervovaném“ stavu, uvolňují se do vnějšího prostředí.

Giardiáza se projevuje nechutenstvím, subfebriliemi, plynatostí, řídkou stolicí, říháním, bolestmi v epigastriu, nevolností (až ke zvracení). U většiny pacientů uvedené klinické příznaky spontánně vymizí po 2-3 týdnech – parazitární invaze se stává chronickou, při které jsou pozorovány následující:

• alergické reakce;
• přítomnost tmavých kruhů pod očima;
• bledost pokožky;
• angulit;
• snížení hladiny hemoglobinu.

Kolonizací střevní sliznice pronikají lamblie do epiteliální vrstvy a způsobují sekreci specifických protilátek třídy IgM a IgG. Sérologické vyšetření těchto imunoglobulinů je považováno za marker imunitní odpovědi lidského organismu na zavlečení parazitů a je doplňkovou laboratorní metodou pro diferenciální diagnostiku parazitárních invazí.

Kdy dělají krevní test na protilátky proti lamblie?

Imunologický krevní test pro stanovení IgG/M na Giardia lamblia provedeno v:

• diagnóza giardiázy;
• stanovení příčin alergických reakcí, gastrointestinálních onemocnění a dermatóz;
• sledování účinnosti antiparazitární léčby.

Jak se připravím na analýzu?

Biologický materiál je krev z žíly.

Krev se pacientovi odebírá ráno (od 8.00:11.00 do XNUMX:XNUMX), nalačno – období hladovění by mělo trvat alespoň čtyři hodiny.

Den před výkonem by měl pacient:

• přestat užívat léky;
• vzdát se pití alkoholu;
• snížit fyzický a dietní stres;
• vyhnout se stresu.

Metoda výzkumu

Enzymově vázaný imunosorbentní test nebo ELISA – je metoda diagnostiky giardiázy v žilní krvi. Laboratorní lékař díky testu zjišťuje množství imunoglobulinů G a M a určuje, jak účinně imunitní systém bojuje s napadajícím parazitem. Technika má následující vlastnosti:

• Test se doporučuje provést týden po podezření na infekci, před tímto obdobím mohou být získány nepravdivé údaje;
• Analýza se používá k identifikaci akutních a chronických stádií a také přítomnosti parazitární infekce v minulosti;
• určení závažnosti patologie, čím vyšší je titr protilátek, tím horší je zdraví člověka (to však znamená, že imunitní systém je schopen aktivně bojovat proti nemoci).

Z analýzy nelze určit, zda se lamblie v současné době nachází v těle člověka, nebo zda měl tuto nemoc v minulosti. Proto je předepisován jako metoda pomocné diagnostiky.

Při odběru se žilní krev přenese do zkumavky s antikoagulantem na stěnách. Jedná se o látku, která zabraňuje srážení a tvorbě trombů. Výsledný vzorek je odeslán do laboratoře, kde se provádějí sekvenční fáze analýzy ELISA:

• umístění zkumavek do centrifugačního zařízení, kde se materiál otáčí vysokou rychlostí tak, aby se obsah rozdělil na kapalnou část (plazmu) a tvarované prvky;
• plazma se nalije do dalších malých zkumavek (jamek) a přidá se konjugát obsahující radionuklidy;
• inkubace se provádí tak, aby došlo k reakci v médiu;
• opakujte inkubaci, poté promyjte obsah, abyste ze vzorku odstranili nenavázané protilátky;
• Jamky s biologickým materiálem se vyšetřují v enzymové imunoanalytické aparatuře, která automaticky vypočítá titr imunoglobulinů M a G a výsledek zobrazí na formuláři.

Formulář vezměte svému lékaři. Například terapeut, pediatr, gastroenterolog. Ten určí, zda má pacient giardiázu a předepíše léčbu nebo její korekci.

Vzhledem k tomu, že krevní test ELISA na Giardia je nespecifický, doporučuje se provést jej společně s testem stolice. Pak bude lékař schopen pochopit, zda jsou v těle přítomni paraziti, nebo zda byly v krvi nalezeny zbytky protilátek po vyléčené nemoci.

Co odhalí analýza

Existuje řada onemocnění, která mohou vyžadovat další testování na giardiázu kvůli nedostatečné účinnosti primární léčby:

• prodloužený průjem bez prokázané etiologie;
• chronické gastrointestinální infekce;
• přetrvávající střevní dysbakterióza;
• pomalý fyzický vývoj dětí, malý přírůstek hmotnosti a výšky;
• přetrvávající kožní patologie – ekzém, dermatitida, kopřivka;
• snížená imunitní funkce;
• prodloužené zánětlivé procesy v průduškách až po obstrukci nebo astma;
• nedostatečná účinnost léčby alergie.

Test se také doporučuje všem pacientům, kteří byli v kontaktu s pacienty infikovanými giardiózou. Například pokud je dítě s infekcí identifikováno ze skupiny mateřské školy.

Rozluštění krevního testu

V těle zdravého člověka protilátky třídy M a G proti střevní lamblii chybí. Tento výsledek je negativní, což je typické pro:

• nepřítomnost helminthické invaze;
• séro-negativní stadium onemocnění;
• účinná léčba giardiázy.

Celkový titr IgG + IgM nižší než 11,0 U/l je považován za sporný výsledek, což ukazuje na slabou imunitní odpověď. Studie se musí opakovat dvakrát s intervalem 3-5 dnů.

Přítomnost celkových protilátek proti Giardia lamblia v testovaném vzorku v množství větším než 11,0 U/l je pozitivním výsledkem indikujícím aktuální giardiázu.

Důvody pro pozitivní výsledek

Když se imunitní systém setká s infekcí, začne aktivně produkovat bílé krvinky a antigeny. S progresí onemocnění se zvyšuje počet ochranných komplexů. Jsou detekovány během diagnostického procesu výpočtem celkového titru imunoglobulinů M a G. První je produkován v reakci na pronikající patogenní mikroorganismus, parazitickou infekci. Druhý typ se nachází v krvi i po ukončení léčby, protože zůstává v lidském těle dlouhou dobu a chrání ho před opětovnou infekcí.

Zjištěná pozitivní reakce proto může ukazovat různé hodnoty:

• přítomnost giardiázy v akutním stadiu s nedávnou infekcí;
• přechod patologie na chronický typ, při absenci léčby nebo použití neúčinných léků;
• nosičství parazita bez projevů zjevných klinických příznaků;
• nedávné onemocnění se zbytky imunoglobulinu G, ale v nepřítomnosti samotného parazita v těle.

Je extrémně vzácné, že ke zvýšenému titru imunoglobulinů dojde při zkřížené reakci s antigeny jiných patogenů.

Negativní výsledek testu

Pokud je koeficient pozitivity menší než 9,0, objeví se záporná hodnota. To naznačuje možnost dvou stavů:

• úplná absence infekce;
• období od infekce do 7 dnů, kdy jsou lamblie v těle již přítomny, ale imunitní systém ještě nestihl zareagovat.

Pokud nejsou v séru detekovány protilátky, obvykle to znamená nepřítomnost infekce.

Důvody pochybných výsledků

Výsledek ukazující obsah titru protilátky 9,0-11,0 je považován za pochybný. Důvodem mohou být následující podmínky:

• minimální množství protilátek v případě nedávné infekce;
• slabá imunitní odpověď, například při imunodeficienci;
• 7-14 dní od okamžiku infekce, kdy jsou titry již stanoveny, ale v nedostatečném množství k detekci akutního stadia infekce.

Pro posouzení infekce se doporučuje počkat alespoň 10 dní, poté můžete získat spolehlivá data.

Sérologická analýza pro stanovení Giardia antigenu ve stolici

Stanovení antigenu lamblia (Giardia lamblia) ve stolici pomocí imunochromatografické analýzy nám umožňuje detekovat přítomnost jak Giardia cyst, tak trofozoitů ve vzorcích stolice.

Příprava na studium:

• Vyhněte se pití alkoholu alespoň 24 hodin před darováním biomateriálu;
• Nedoporučuje se darovat stolici po fluorografii, rentgenu nebo fyzioterapeutických procedurách.

Studijní charakteristiky:

• Typ biomateriálu: výkaly
• Synonyma (rus): imunochromatografický test pro kvalitativní stanovení Giardialamblia ve vzorcích stolice
• Synonyma (eng): Giardialamblia Ag
• Metody výzkumu: enzymatická imunoanalýza
• Dodací lhůta: 5-7 dní

Infekce giardiázou u dětí je několikrát vyšší než u dospělých a dosahuje 15%. Při absenci diagnózy a adekvátní terapie vede převoz zpočátku k dyspeptickým poruchám a zvýšení teploty.

Chronická forma giardiázy je charakterizována závažnějšími poruchami:

• onemocnění gastrointestinálního traktu;
• alergické reakce;
• kožní projevy;
• zaostávání ve vývoji;
• psychosomatické poruchy.

Problém s přesnou diagnózou giardiózy může spočívat v biologii organismu prvoka. Existuje ve formě cyst (při požití dochází k infekci) a vegetativního organismu – trofozoitu. Ten žije a množí se v tenkém střevě. Navíc k uvolňování nových cyst nedochází neustále, ale sporadicky. Proto, i když jsou zjevné známky infekce, není vždy možné detekovat cysty ve stolici – je třeba je testovat několikrát. Trophozoity jsou špatně zachovalé a lze je vidět pouze v teplých vzorcích stolice. Výsledek může záviset na správném dodání materiálu a zkušenostech laboranta. Duodenální intubace k detekci trofozoitů je složitý postup a ne vždy je možné ji u dítěte provést. Analýza protilátek v krvi proti Giardii není vhodná pro diagnostické účely, protože se netvoří bezprostředně po infekci.

Výhody ELISA pro Giardia antigen ve stolici

Enzymově vázaný imunosorbentní test pro detekci specifických antigenů ve stolici nemá všechny výše uvedené nevýhody. Senzitivita a specificita metody je téměř 100%, proto pozitivní analýza znamená přesnou přítomnost cyst Giardia nebo trofozoitů ve vzorku a je diagnosticky spolehlivá. Metoda nevyžaduje invazivní intervence – duodenální intubaci nebo odběr žilní krve. Vzorky stolice k analýze není třeba spěchat do laboratoře, jako je tomu u mikroskopie. Mohou být skladovány v chladničce po dobu až 3 dnů a dokonce i zmrazené. To neovlivní přesnost analýzy.

Význam analýzy

Giardia pronikají do lidského těla fekálně-orální cestou, po které se šíří po celém gastrointestinálním traktu. Způsobují dyspeptické poruchy, poruchu tvorby stolice, alergické reakce a další příznaky. Pokud akutní stadium není léčeno včas, stane se chronickým a patologie bude obtížnější odstranit. Proto lékaři doporučují včasné stanovení antigenů Giardia ve vzorcích stolice, aby bylo možné identifikovat patogenní mikroorganismus a provést správnou léčbu.

Provedení imunochromatografického testu poskytuje lékaři i pacientovi řadu výhod:

• detekce přesného typu patogenního mikroorganismu, který způsobil příznaky poruch trávení a imunitní přecitlivělosti;
• diferenciální diagnostika s infekcí jinými patogeny, různé typy střevních poruch, alergické reakce a další patologie;
• předepisování správných metod terapie, které rychle povedou k účinku a eliminují riziko komplikací giardiázy;
• vyloučení rizika předepisování nesprávných léků, jako jsou antibiotika nebo antiseptika, které mohou způsobit nežádoucí reakce;
• prevence přechodu akutního stadia giardiázy do chronického stadia;
• zabránění šíření lamblie do jater, což může ohrozit rozvoj hepatitidy a fibrózy;
• posouzení kvality provedeného ošetření, po kterém by indikátorový proužek v testovacím systému neměl vykazovat pozitivní výsledek.

Imunochromatografický test ke stanovení antigenů Giardia ve vzorcích stolice je objednán od lékaře, specialisty na infekční onemocnění, pediatra, gastroenterologa nebo jiného specialisty, který má podezření na giardiázu.

Indikace

Po infekci Giardií začíná zpočátku inkubační doba. Trvá 1-3 týdny, během kterých se neobjeví žádné známky onemocnění. Profylaktická analýza dává negativní výsledky. Proto se doporučuje stanovení Giardia antigenů ve vzorcích stolice několikrát opakovat, aby se eliminovalo riziko nespolehlivých údajů.

Lékař předepíše test, pokud je k dispozici. následující příznaky giardiázy:

• bolest břicha, ztráta chuti k jídlu, nevolnost, říhání, nadýmání, plynatost;
• změna kvality stolice, stává se vodnatá, tekutá, pění, objevují se v ní částice tuku, hlenu, hnisu, v těžkých případech i krve;
• ztráta hmotnosti, vyčerpání;
• zvětšené lymfatické uzliny, zhoršení výkonnosti, malátnost, mdloby, snížený krevní tlak;
• alergické reakce – kopřivka, dermatitida, olupování a svědění kůže.

Všechny tyto příznaky jsou přímou indikací pro analýzu. Může být provedena profylakticky, pokud byl pacient dříve léčen nebo měl úzký kontakt s osobou, u které byla diagnostikována giardiáza.

Příprava vzorků, odběr, skladování a přeprava

Před provedením testu se pacientovi doporučuje připravit se. Kromě hlavních fází přípravy by 7-10 dní před testem neměl užívat antibiotika, antivirotika nebo fungicidy.

Po přípravě se shromažďují výkaly podle pravidel:

• kupte si v lékárně sterilní jednorázovou nádobu, k ní by měla být přiložena lžička a víko (nepoužívejte cizí nádoby, obsahují mikroorganismy a látky, které zkazí výsledek testu);
• Ke sběru biomateriálu použijte sterilní lžičku, která je součástí balení, jiné předměty nelze použít;
• vyprázdnit střeva, sbírat malé množství výkalů z různých oblastí, aby se zvýšila šance na detekci Giardie, pokud je přítomna;
• oblasti s krví, hnisem, hlenem, pokud jsou přítomny, jsou přidány do odebraného vzorku stolice;
• Pevně ​​našroubujte víko na nádobu.

Odebraný vzorek stolice se skladuje a přepravuje podle následujících pravidel:

• nádoba s výkaly je okamžitě odeslána do laboratoře, během přepravy by teplota neměla překročit 22-23 °;
• pokud není možné vzorek ihned přepravit, umístí se na dveře chladničky při teplotě 4-5°;
• zmrazení je nepřijatelné;
• Během skladování a přepravy by do nádoby nemělo zasahovat přímé sluneční světlo.

Čím dříve vzorek s biomateriálem dorazí do laboratoře, tím jsou data spolehlivější. Proto se ihned po ranní stolici odebírají výkaly a posílají se do laboratoře.

Metodika a interpretace výsledků

Biomateriálem pro výzkum jsou výkaly, které je vhodné sbírat v malém množství z více oblastí.

Metoda se skládá z několika fází:

• přidání protilátek do vzorku pro přilákání antigenů Giardia;
• přidání konjugátu, peroxidázy a protilátek k odstranění dalších nezreagovaných protilátek;
• promývání z nenavázaných enzymů;
• přidání chromogenu pro zobrazení interakce enzymatického komplexu a peroxidu;
• inhibice reakce zastavovacím roztokem, změna barvy z modré na žlutou.

Vizuální hodnocení nebo ovládání čtečky

Pozitivní vzorek má tmavší barvu než negativní kontrolní vzorek, což lze určit vizuálně. Čtečka vykazuje vyšší optickou hustotu pro pozitivní vzorky oproti kontrole a nižší optickou hustotu pro negativní vzorky.

Další doporučení

Po hlavních krocích provedení enzymového imunotestu ke stanovení antigenů Giardia je ve vzorcích stolice identifikována barva. Pokud zůstane tmavě modrá, pacient je zdravý a neexistuje žádná patologie. Pokud je žlutá barva, laboratorní forma indikuje přítomnost Giardia. Technika je kvalitativní, to znamená, že v procesu její implementace je odhalena přítomnost nebo nepřítomnost Giardia. Jejich přesný počet není stanoven.

V procesu přípravy, provádění testu a dekódování se doporučuje dodržovat následující doporučení:

• test je nejlépe opakovat dvakrát, aby se předešlo falešně pozitivním nebo falešně negativním údajům;
• pokud jsou příznaky nejasné, můžete diagnostikovat nejen giardiázu, ale současně i jiné střevní infekce;
• nezávislé dekódování je nepřijatelné, protože pacient bude moci použít formulář k výpočtu přítomnosti nebo nepřítomnosti giardiázy, ale lékař navíc vyhodnotí jeho anamnézu a předepíše správnou léčbu;
• kvantitativní test není vyžadován, protože infekce vyžaduje okamžitou léčbu bez ohledu na rozsah jejího šíření;
• po ukončení terapie musí být znovu testovány, chronické stadium giardiázy je obtížně léčitelné a může být zapotřebí další medikace.

Navzdory provedení vysoce kvalitního testu bez přesného výpočtu úrovně Giardia budou výsledky vždy spolehlivé a informativní. S nimi je pro lékaře snazší provádět terapii.