Zkušenosti s používáním léku Serenia u psů při onemocněních doprovázených komplexem příznaků zvracení

Zvracení je běžným klinickým příznakem u malých domácích zvířat. Mezi nejčastější příčiny patologického zvracení u psů patří gastritida a žaludeční vředy, otravy různého původu, neprůchodnost trávicího traktu, bakteriální a virové infekce a invaze. Zároveň malá domácí zvířata často zvrací kvůli kinetóze spojené s přepravou koček a psů.

Mechanismus zvracení je regulován centrem zvracení, které se nachází v prodloužené míše. Ke stimulaci tohoto centra dochází v důsledku elektrických impulzů přicházejících přes periferní nervová vlákna. To má za následek řadu nervových vzruchů, které způsobují kontrakci bránice a břišních svalů a také relaxaci žaludeční kardie, což má za následek antiperistaltiku jícnu a odstranění obsahu žaludku ústy zvířete.

Zvracení obvykle předchází nevolnost (apatie, zvýšené slinění, olizování, časté polykací pohyby) a nechutenství. Silné zvracení může vést k dehydrataci, hypovolemickému šoku a narušení acidobazické a elektrolytové rovnováhy v těle. Časté a silné zvracení může způsobit aspirační pneumonii.

Léčba přetrvávajícího zvracení zlepšuje pohodu zvířete a pomáhá předcházet komplikacím. Současně zvíře potřebuje důkladné vyšetření, aby se zjistila a odstranila příčina patologického procesu zvracení.

K zastavení záchvatů zvracení u psů se používají veterinární léky obsahující jako účinnou látku maropitant citrát.

S ohledem na důležitost rozšíření sortimentu léků zabraňujících zvracení a v rámci náhrady dovozu vyvinula společnost OOO VIK – Animal Health lék „Hollicalm“ ve formě tablet.

Maropitant, aktivní složka přípravku Hollycalm, je antagonista neurokininového receptoru (NK1) a inhibuje vazbu substance P, neuropeptidu ze skupiny tachykininů, v centrálním nervovém systému, což pomáhá předcházet zvracení.

Hodnocení bioekvivalence („farmakokinetická ekvivalence“) léčivých přípravků je hlavním typem výzkumu reprodukovaných (generických) léčiv obsahujících stejné množství účinné látky jako v odpovídajícím originálním léčivém přípravku, což umožňuje učinit rozumné závěry o účinnosti a bezpečnosti srovnávané léčivé přípravky na základě relativně menšího objemu předklinických údajů a v kratším časovém horizontu než při provádění klinických studií.

Při studiu bioekvivalence je možné vyhodnotit rychlost a stupeň absorpce účinných látek dvou porovnávaných léčiv, na základě čehož lze vyvodit závěr o bioekvivalenci reprodukovaného léčiva v určité lékové formě a dávkování odpovídající dávkovou formu a dávku referenčního léčiva.

účel práce — studie bioekvivalence reprodukovaného léku „Hollicalm“ ve formě tablet (výrobce OOO „VIK – Animal Health“, Rusko) a referenčního léku „Serenia“ ve formě tablet (výrobce Zoetis Inc., USA) u psů po jejich jediné úvod k perorálnímu podání.

Serenia byla vybrána jako referenční lék na základě údajů z elektronického systému Galen ruské Federální služby pro veterinární a fytosanitární dohled, kde má Serenia platnou registraci v Ruské federaci a byla registrována na základě výsledků preklinických a klinických studií potvrzujících její kvalita, účinnost a bezpečnost.

Materiály a metody výzkumu

Jako testovací systém pro studii byli vybráni psi jako druh zvířat, u kterých se plánuje použití léku v budoucnu a kterým je vhodné podávat lék perorálně bez poškození celistvosti tablet.

Výzkumné práce byly provedeny v roce 2023. Experimentu se účastnil kavkazský pastevecký pes ve věku 2–3 roky s tělesnou hmotností 41–48 kg.

Byla vytvořena experimentální skupina 6 psů (fen a psů). Každá skupina zvířat se skládala ze 6 jedinců, z nichž každému bylo přiděleno individuální číslo. Experimentální zvířata nedostávala žádné další léky po dobu nejméně 30 dnů před zahájením studií a během období studie.

Ve studii byl použit sekvenční experimentální design vzhledem k relativně krátkému poločasu (až 9 hodin) účinné látky maropitantu v těle zvířete. Zvolený design umožňuje sekvenční podávání jedné skupině zvířat nejprve referenčního léku a poté generického léku s časovým intervalem mezi podáváním alespoň šestinásobkem poločasu aktivní látky. V rámci popsané práce byla doba mezi podáním léků „Serenia“ a „Hollicalm“ 72 hodin.

Před experimentem bylo každé zvíře zváženo, aby se vypočítala individuální dávka léčiva. Testovaná léčiva byla psům podávána jednou, jednotlivě, perorálně.

Pro studie byly použity léky „Serenia“ a „Hollicalm“, obsahující 1 mg maropitantu v 60 tabletě. Dávka léčiv, která byla podávána každému zvířeti, byla přibližně 8 mg maropitantu na 1 kg hmotnosti zvířete. Tato dávka je maximální terapeutická dávka v souladu se schváleným návodem k použití referenčního léku.

Jednotlivé tělesné hmotnosti pokusných psů a dávky účinné látky léků, které dostávali, jsou uvedeny v tabulce 1.

Časové body pro odběr biovzorků pro hodnocení koncentrací maropitantu v séru byly zvoleny tak, aby poskytly nejúplnější data pro každou část farmakokinetické křivky. Za tímto účelem se počítalo s častým odběrem vzorků poblíž T._max, stejně jako alespoň 4 body během terminální fáze. Výběr biologických vzorků byl tedy proveden v následujících bodech: před užitím reprodukovaného (referenčního) léku a poté po 15, 30, 45 minutách. a 1, 1,5, 2, 4, 6, 8, 12, 15, 24, 32 a 48 hodin po užití léků.

V každém časovém bodě byly odebrány vzorky krve od 6 psů na skupinu. Při manipulacích byly dodržovány zásady humánního zacházení s pokusnými zvířaty zaměřené na snížení jejich bolesti a utrpení. Krev byla odebírána do kódovaných zkumavek na jedno použití s ​​aktivátorem koagulace. Po vytvoření sraženiny a separaci séra byly vzorky krve centrifugovány při 3500 otáčkách za minutu po dobu 5 minut. Poté byla oddělená frakce krevního séra umístěna do Eppendorfových zkumavek. Vzorky krevního séra byly zmraženy a transportovány v termonádobě ve zmrazeném stavu do bioanalytické laboratoře „BIOVISOR“ (Moskva, Rusko).

Hlavním parametrem, který byl v průběhu studie zjišťován, byl obsah účinné látky léčiv v krevním séru psů. K tomuto účelu byla použita ověřená metoda kvantitativního stanovení maropitantu ve vzorcích zvířecího krevního séra pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie s tandemovou hmotnostní spektrometrickou detekcí. Pro tento účel byl použit chromatografický hmotnostní spektrometrický systém Shimadzu LCMS-8050 (Japonsko).

Při validaci metody byly vzaty v úvahu následující parametry: linearita, matricový efekt, stupeň extrakce, specificita, selektivita, přenosový efekt, přesnost, přesnost, nejnižší mez kvantifikace, tolerance ředění, stabilita analytu a vnitřního standardu .

Získané sérové ​​koncentrace maropitantu u psů byly použity k výpočtu následujících farmakokinetických parametrů:

• poločas účinné látky (T_1/2);
• maximální koncentrace účinné látky (C_max);
• plocha pod křivkou „koncentrace účinné látky – čas“ v časovém intervalu od 0 do okamžiku (t) odběru posledního vzorku biomateriálu (AUC_0-t);
• plocha pod křivkou „koncentrace účinné látky – čas“ v rozsahu od 0 do ∞ (AUC_0-∞);
• plocha pod křivkou „součin času a koncentrace léčiva (AUMC);
• střední retenční čas látky v systémovém oběhu (MRT);
• poměr AUC_0-t/AUC_0-∞.

Na základě vypočtených parametrů C_max a AUC_0-t provedla hodnocení bioekvivalence testovaných léků.

Statistická analýza dat získaných během experimentu zahrnovala zjištění průměrných hodnot relativních směrodatných odchylek (RSD, %) od průměru a směrodatných chyb v aplikaci Microsoft Excel (USA). Výpočty farmakokinetických parametrů byly provedeny v PKSolver (doplňkový modul Microsoft Excel) s použitím nekompartmentového (bezkompartmentového) modelu distribuce maropitantu u psů.

Bioekvivalence porovnávaných léků byla stanovena porovnáním hranic intervalů spolehlivosti pro poměr geometrických středních hodnot AUC (0–24) a C_max po užití studijních a referenčních léků se stanovenými limity ekvivalence 80,00–125,00 %.

Pokus byl proveden v souladu s požadavky stanovenými Směrnicí Evropského parlamentu a Rady 2010/63/EU ze dne 22. září 2010 o ochraně zvířat používaných pro vědecké účely a zásadách pro zacházení se zvířaty v souladu s Článek 4 federálního zákona č. 498-FZ.

Výsledky a diskuse

Na základě získaných údajů (tabulka 2) bylo zjištěno, že maropitant se rychle vstřebává a je detekován v krevním séru psů po 15 minutách – jak po podání referenčního léku „Serenia“, tak po podání generického léku „Hollicalm“.

U referenčního léku bylo maximálních koncentrací maropitantu v krvi dosaženo 1–4 hodiny po podání, s maximálními koncentracemi účinné látky v rozmezí 542,503–928 ng/ml.

Poté koncentrace účinné látky v krevním séru postupně klesala až na úroveň 4,041–12,734 ng/ml do posledního odběru krve (48 hodin). Podobný obraz byl pozorován po zavedení reprodukovaného léku. Koncentrace maropitantu dosáhly vrcholu za 1,5–2 hodiny po podání a pohybovaly se v rozmezí 541,379–855,536 ng/ml. Poté docházelo k postupnému snižování koncentrace účinné látky až na úroveň 1,867–14,062 ng/ml do posledního odběru krve (48 hodin).

Graf změn koncentrace maropitantu v krvi psů je uveden na obrázku 1.

Na základě naměřených koncentrací maropitantu v krevním séru psů byly vypočteny jeho farmakokinetické parametry (tabulka 3).

Data (tabulka 3) prokázala, že průměrné hodnoty vypočtených farmakokinetických parametrů účinné látky pro studovaná generika a referenční léčiva byly podobné. Například: aritmetický průměr C_max pro referenční lék to bylo 675,280 ng/ml a pro generický lék to bylo 679,615 ng/ml; poločas rozpadu maropitantu pro lék „Serenia“ je v průměru 8,0 hodin, pro lék „Hollicalm“ – 8,1 hodiny; aritmetický průměr plochy pod farmakokinetickou křivkou (od nuly do posledního stanovení krve) maropitantu pro referenční léčivo je 6150,460 ng/ml•h, a pro reprodukované – 5654,302 ng/ml•hod

Pro zbývající vypočtené farmakokinetické parametry (AUC_0-∞, AUMC_0-∞, MRT, AUC_0-t/AUC_0-∞) hodnoty byly také blízko. Přítomnost (nepřítomnost) bioekvivalence mezi reprodukovaným lékem „Hollicalm“ a referenčním lékem „Serenia“, vybraným pro studie lékové formy a obsahu účinných látek, byla posuzována v souladu s Pravidly pro provádění bioekvivalenčních studií léčivých přípravků Euroasijská hospodářská unie. Bioekvivalence léčiv byla hodnocena na základě předpokladu lognormálního rozdělení naměřených hodnot C._max, AUC_(0-t), AUC_(0-∞) a C_max/AUC_(0-t).

Výsledky výpočtu intervalů spolehlivosti pro poměry farmakokinetických parametrů maropitantu jsou uvedeny v tabulce 4.

Dvoustranné intervaly spolehlivosti pro poměry C_max, AUC_0-t jsou v rozmezí 80–125 %.

Na základě získaných dat tedy s přihlédnutím k tomu, že intervaly spolehlivosti poměrů pro logaritmicky transformované hodnoty C_max a AUC_0-t a nepřekračují stanovené limity, je přijata hypotéza bioekvivalence léků „Serenia“ a „Hollicalm“.

Závěry

Registrační klinická studie bioekvivalence reprodukovaného léku „Holikalm“ ve srovnání s referenčním lékem „Serenia“ byla provedena v experimentu na cílovém zvířecím druhu – psech.

Pro účinnou látku maropitant byla prokázána vysoká míra podobnosti mezi individuálním a průměrným farmakokinetickým profilem studovaných léčiv. Reprodukované a referenční léky se vyznačují podobnými hodnotami relativní biologické dostupnosti a maximální koncentrace maropitantu. Intervaly spolehlivosti pro poměry geometrických středních hodnot farmakokinetických parametrů maropitantu jsou plně v souladu se specifikovaným rozsahem.

Výsledky získané během této studie nám tedy umožnily vyvodit závěr o bioekvivalenci reprodukovaného léku „Holycalm“, vyvinutého společností „VIC – Animal Health“ (Rusko), ve srovnání s referenčním lékem „Serenia“ (Zoets, USA), což nám umožňuje doporučit „Holycalm“ pro použití ve veterinární praxi jako antiemetikum pro psy.

O autorech

Sergej Vladislavovič Abramov1; kandidát veterinárních věd

Andrej Vladimirovič Balyšev2; kandidát biologických věd

Vjačeslav Viktorovič Golovin1; kandidát biologických věd

Pavel Pavlovič Kočetkov1

Boris Viktorovič Housle3; Kandidát veterinárních věd

1OOO „BIOVISOR“, st. Nagornaja, 3A, Moskva, 117186, Rusko

2Výzkumný ústav Povolží pro výrobu a zpracování masa a mléčných výrobků, st. jim. Rokossovskogo, 6, Volgograd, 400131, Rusko

3Federální vědecké centrum – Všeruský výzkumný ústav experimentální veterinární medicíny pojmenovaný po K.I. Skrjabin a Ya.R. Kovalenko Ruská akademie věd, Rjazansky prospekt, 24, budova 1, Moskva, 109428, Rusko

MDT 619:615.033
DOI: 10.32634/0869-8155-2024-385-8-34-39