Agregace spermií: co to je, indikátory spermogramu pro aglutinaci spermií

Hlavním účelem vyšetření ejakulátu je určit schopnost spermií oplodnit se a identifikovat onemocnění a/nebo patologické procesy, které způsobily odpovídající léze. Analýza spermií je nedílnou součástí diagnostiky neplodnosti. Přibližně ve 47 % případů je příčinou bezdětnosti u manželských párů muž. Příčinou mužské neplodnosti mohou být onemocnění varlat, prostaty, porucha vodivosti chámovodu, onemocnění a malformace močové trubice. Rozbor spermatu je také jedním z testů používaných k diagnostice hormonálních poruch, onemocnění pohlavních orgánů nebo jejich vývojových vad.

Normálně je ejakulát suspenzí spermií v sekretu varlat a jejich příloh, která se v době ejakulace mísí se sekretem prostaty, semenných váčků a bulbouretrálních žláz.

Spermie tvoří asi 5 % objemu spermatu a jsou produkovány ve varlatech. Přibližně 60 % objemu semene je produkováno v semenných váčcích. Je to viskózní, neutrální nebo mírně alkalická kapalina, často žlutá nebo dokonce vysoce pigmentovaná kvůli vysokému obsahu riboflavinu.

Prostata produkuje přibližně 20 % objemu semenné tekutiny. Tato mléčně podobná tekutina má mírně kyselou reakci (pH kolem 6,5), a to především díky vysokému obsahu kyseliny citrónové. Prostatická sekrece je také bohatá na kyselou fosfatázu a proteolytické enzymy, předpokládá se, že proteolytické enzymy jsou zodpovědné za koagulaci a zkapalnění semenné tekutiny.

Méně než 10–15 % objemu spermií je produkováno v nadvarleti, vas deferens, bulbouretrálních a uretrálních žlázách.

Standardní spermogram hodnotí fyzikální (makroskopické) a mikroskopické parametry ejakulátu (tabulka, obr. 1-3).

Podmínky pro odběr a skladování vzorků

Ejakulát musí být získán po nejméně 48 hodinách, ale ne více než 7 dnech, sexuální abstinence.

Ejakulát získaný při masturbaci musí být zcela odebrán a udržován v teple (20–40 °C). Vzorek je stabilní po dobu jedné hodiny, pokud je však motilita spermií abnormálně nízká (méně než 25 % spermií s rychlou lineární dopřednou pohyblivostí), měla by být doba mezi odběrem vzorku a analýzou minimalizována.

Metoda výzkumu

Makroskopické vyšetření – stanovení konzistence, objemu, zápachu, barvy, viskozity a pH ejakulátu.

Spermie získané během ejakulace jsou husté a viskózní, což je způsobeno koagulací sekrece semenných váčků. Normálně by při pokojové teplotě měl vzorek ejakulátu zkapalnit do 60 minut. Pokud ejakulát zůstane delší dobu viskózní, poloviskózní nebo vůbec nezkapalní, pak lze předpokládat zánět prostaty. Normálně je objem ejakulátu 2–6 ml. Množství menší než 1,0 ml je typické pro deficit androgenů, endokrinní onemocnění, zúžení a deformaci váčků a chámovodů. Maximální objem může dosáhnout 15 ml. Objem ejakulátu neovlivňuje plodnost. Vůně normálního ejakulátu je specifická a je způsobena sperminem (připomíná vůni „čerstvých kaštanů“). Specifický zápach zeslábne nebo zcela chybí, když jsou zablokovány vylučovací kanály prostaty. Při hnisavých zánětlivých procesech je zápach spermií způsoben odpadními produkty bakterií, které zánětlivý proces způsobily.

Mikroskopické vyšetření – studium motility spermií a přítomnosti aglutinace v nativním preparátu, počítání počtu spermií v Gorjajevově komůrce, studium morfologie spermií, buněk spermatogeneze a diferenciální diagnostika živých a mrtvých spermií v barvených preparátech.

Mikroskopické vyšetření ejakulátu se provádí po jeho úplném zkapalnění.

Pro hodnocení motility spermií se doporučuje jednoduchý kategoriální klasifikační systém. Pro klasifikaci se postupně zobrazí 200 spermií v 5 zorných polích mikroskopu (obr. 1).

Pohyblivost každé spermie je klasifikována do kategorií pomocí následujících kritérií:

• rychlý pohyb vpřed;
• pomalý a pomalý pohyb vpřed;
• netranslační pohyb;
• nepohyblivá spermie.

Nejprve se spočítají všechna spermie kategorií A a B v omezené oblasti zorného pole nebo, pokud je koncentrace spermií nízká, v celém zorném poli (%). Dále se ve stejné oblasti spočítají neprogresivní spermie (kategorie c) (%) a nepohyblivá spermie (kategorie d) (%).

Pohyblivost lze určit počítáním v Gorjajevově komoře. Spermie se zředí 20krát fyziologickým roztokem a v komoře se vyšetřují pouze nepohyblivá a málo pohyblivá spermie.

Výpočet se provádí podle vzorce:

X = A – (B + C), kde,

A – celkový počet spermií;

B – počet málo pohyblivých spermií;

C – počet nepohyblivých spermií.

Procento aktivně pohyblivých spermií je tedy (Y):

Pohyblivost spermií závisí na roční době a denní době. Existují důkazy, že motilita spermií na jaře klesá (sezónní výkyvy). Při sledování počtu aktivně pohyblivých spermií během dne byl zaznamenán nárůst jejich počtu v druhé polovině dne (cirkadiánní rytmy).

Snížení motility spermií pod normální hodnotu se nazývá asthenozoospermie. Mírná astenozoospermie – počet aktivně a pomalu pohyblivých spermií s progresivním pohybem celkem je méně než 50 %, ale více než 30 %.

Hodnocení aglutinace spermií. Aglutinace spermií se týká slepování pohyblivých spermií jejich hlavami, ocasy nebo hlavami a ocasy. Vzájemná adheze nepohyblivých spermií nebo pohyblivých spermií k nitkám hlenu, jiným buňkám nebo buněčným úlomkům by měla být zvážena a zaznamenána nikoli jako aglutinace, ale jako nespecifická agregace. Během studie se zaznamenává typ aglutinace (hlavy, ocasy, smíšená varianta). K posouzení stupně aglutinace od „–“ (žádná aglutinace) do „+++“ (závažný stupeň, při kterém aglutinaci podléhají všechna pohyblivá spermie) lze použít semikvantitativní metodu. Normálně nedrží pohromadě více než 3–5 %. Pokud je počet aglutinovaných spermií 10–15 %, můžeme hovořit o poklesu jejich oplodňovací schopnosti.

Celkový počet spermií se počítá v Gorjaevově komoře. Celkový počet spermií v ejakulátu se vypočte vynásobením počtu spermií v 1 ml spermatu objemem uvolněných spermií.

Normospermie – 1 ml ejakulátu zdravého muže obsahuje více než 20 milionů spermií.

Polyzoospermie – počet spermií v 1 ml ejakulátu přesahuje 150 milionů.

Oligozoospermie – 1 ml ejakulátu obsahuje méně než 20 milionů spermií.

Azoospermie – nepřítomnost spermií v ejakulátu.

Aspermie – v dodávané tekutině nejsou žádné spermie nebo buňky spermatogeneze.

Hodnocení životaschopnosti spermií. Pro posouzení životaschopnosti spermií se na podložní sklíčko smíchá jedna kapka čerstvého ejakulátu s kapkou standardního eosinového barviva. Živá spermie v takových přípravcích nejsou obarvena (bílá); Mrtvé spermie jsou zbarveny červeně, protože jejich plazmatické membrány jsou poškozeny. Životaschopnost se týká podílu (v procentech) „živých“ spermií. Životaschopnost by měla být hodnocena, pokud procento nepohyblivých spermií překročí 50 %.

Hodnocení životaschopnosti může sloužit jako kontrola přesnosti hodnocení motility spermií, protože procento mrtvých buněk by nemělo překročit (s přihlédnutím k chybě počítání) procento nepohyblivých spermií. Přítomnost velkého počtu živých, ale nepohyblivých spermií může naznačovat strukturální defekty bičíků. Součet mrtvých a živých spermií by neměl překročit 100 %.

Charakteristika buněčných elementů ejakulátu. Typicky ejakulát obsahuje nejen spermie, ale také další buňky, které se souhrnně označují jako „kulaté buňky“. Patří sem epiteliální buňky močové trubice, buňky prostaty, nezralé zárodečné buňky a leukocyty. Normálně by ejakulát neměl obsahovat více než 5*106 kulatých buněk/ml.

Ve většině případů lidský ejakulát obsahuje leukocyty, hlavně neutrofily. Zvýšená hladina těchto buněk (leukospermie) může indikovat přítomnost infekce a špatnou kvalitu spermií. Počet leukocytů by neměl překročit 1106/ml. Počítání se provádí v Gorjajevově komoře stejným způsobem jako počítání spermií.

Kromě leukocytů může ejakulát obsahovat nezralé zárodečné buňky (buňky spermatogeneze) v různých fázích zrání: spermatogonium, spermatocyt prvního řádu, spermatocyt druhého řádu, spermatidy. (obr. 2)

Přítomnost různých typů nezralých buněk spermatogeneze v ejakulátu obvykle ukazuje na poruchu spermatogeneze. Nadbytek těchto buněk je důsledkem dysfunkce semenných tubulů, zejména se sníženou spermatogenezí, varikokélou a patologií Sertoliho buněk.

Hodnocení morfologie spermií. K analýze se používá stěr obarvený histologickými barvivy (hematoxylin, Romanovsky-Giemsa atd.), ve kterém se provádí sekvenční počet 200 spermií (jednotlivý počet 200 spermií je výhodnější než dvojnásobný počet 100 spermií). a počet normálních a patologických forem je vyjádřen v procentech (obr. 3).

Hlavička spermie by měla mít oválný tvar. Poměr délky hlavy k její šířce by měl být od 1,5 do 1,75. Měla by být viditelná dobře definovaná akrozomální oblast zahrnující 40–70 % plochy hlavy. Krček spermie by měl být tenký, 1,5krát delší než je délka hlavičky spermie, a měl by být připojen k hlavičce podél své osy. Velikost cytoplazmatických kapének by neměla přesáhnout 1/2 velikosti hlavičky normální spermie. Ocas by měl být rovný, stejně silný v celém rozsahu a poněkud užší ve střední části, neměl by být zatočený a měl by mít délku asi 45 mikronů. Poměr délky hlavy k délce ocasu u normálních spermií je 1:9 nebo 1:10.

Vady hlavy: velké, malé, kuželovité, hruškovité, kulaté, amorfní, s vakuolami v oblasti chromatinu; hlavy s malou akrozomální oblastí, vakuolizovaný akrozom, s asymetricky umístěným akrozomem; dvojité a vícenásobné hlavy, hlavy s kompaktní strukturou chromatinu atd.

Vady krku a střední části: „zakloněný“ krk (krk a ocas svírají s dlouhou osou hlavy úhel 90°), asymetrické uchycení střední části hlavy k hlavě, zesílená nebo nerovná střední část, abnormálně tenký střední část (absence mitochondriální membrány) a jakákoli jejich kombinace.

Vady ocasu: ocasy, které jsou krátké, mnohočetné, špendlíkovitého tvaru, zlomené, šikmé (úhel větší než 90°), nerovnoměrná tloušťka ocasu, tenká střední část, zatočený konec, zcela zatočený a jakákoli jejich kombinace. V diferenciálním morfologickém hodnocení se berou v úvahu pouze spermie s ocasy.

Teratozoospermie – zvýšení počtu patologických forem spermií nad referenční hodnoty. Těžká teratozoospermie dramaticky snižuje šance na oplodnění a zvyšuje pravděpodobnost malformací plodu, pokud dojde k oplodnění. Teratozoospermie se obvykle kombinuje s oligozoospermií a astenozoospermií.

Spermie, jejichž hlava je uzavřena v cytoplazmatické kapénce, a ta, jejichž cytoplazmatická kapénka je umístěna na krku ve formě šátku a je více než 1/3 ve vztahu k velikosti hlavy, se rozlišují jako nezralá nebo mladá. V normálním spermiogramu tvoří asi 1 %.

Referenční intervaly

• Objem – 2,0 ml nebo více;
• pH – 7,2 nebo více;
• koncentrace – 20 *106 spermií/ml nebo více;
• celkový počet – 40 * 106 spermií nebo více v ejakulátu;
• mobilita – 50 % a více mobilních (kategorie a+b); 25 % nebo více s progresivním pohybem (kategorie A) do 60 minut po ejakulaci;
• životaschopnost – 50 % nebo více živých, tzn. nebarvené;
• leukocyty – méně než 1 * 106/ml.

Klasifikace parametrů ejakulátu

• Normozoospermie – normální ejakulát;
• oligozoospermie – koncentrace spermií pod normálními hodnotami;
• asthenozoospermie – motilita pod normálními hodnotami;
• teratozoospermie – morfologie pod normálními hodnotami;
• oligoastenoteratozoospermie – přítomnost porušení všech tří ukazatelů;
• azoospermie – žádné spermie v ejakulátu;
• aspermie – žádný ejakulát.