Enzymová imunoanalýza krve s dekódováním indikátorů

ELISA je moderní laboratorní vyšetření, které hledá v krvi specifické protilátky (nebo antigeny) na konkrétní onemocnění s cílem identifikovat nejen etiologii, ale i stadium onemocnění.

V běžné veterinární praxi se ELISA doporučuje v následujících případech:

1. hledat specifické protilátky proti jakékoli infekční nemoci;
2. hledání antigenů jakýchkoli infekčních onemocnění;
3. vyšetření hormonálního stavu pacienta;
4. screening na autoimunitní onemocnění.

Jako každá laboratorní diagnostická metoda má i ELISA své výhody a nevýhody. Mezi výhody metody patří:

1. vysoká specificita a senzitivita metody (více než 90 %);
2. schopnost identifikovat onemocnění a sledovat dynamiku procesu, to znamená porovnat počet protilátek v různých časových obdobích;
3. dostupnost a rychlost této studie;
4. neinvazivní metoda sběru materiálu, nikoli výzkum;

Nevýhodou této metody je skutečnost, že analýza neodhalí samotný patogen, ale pouze imunitní odpověď na něj (protilátky).

<strong>Podstata metody ELISA</strong>

Existuje několik typů ELISA: přímá, nepřímá, blokující metoda, kompetitivní. V praxi se však nejčastěji používá heterogenní imunoanalýza na pevné fázi neboli ELISA.

Základem enzymové imunoanalýzy je imunitní reakce antigenu a protilátky s tvorbou imunitního komplexu, která má za následek změnu enzymatické aktivity specifických značek na povrchu protilátek.

V zásadě lze tento proces rozdělit do několika fází:

1. Na povrchu jamek destičky testovacího systému je purifikovaný antigen specifického patogenu. Když se přidá zvířecí krevní sérum, dojde ke specifické reakci mezi tímto antigenem a požadovanou protilátkou;
2. Poté se do jamky přidá speciální chromogen (konjugát značený peroxidázou). Dochází k enzymatické reakci, jejímž výsledkem je vytvoření barevné látky v jamce destičky. Intenzita jeho barvy závisí na množství imunoglobulinů (protilátek) obsažených v séru zvířete;
3. pak se vyhodnotí výsledek. Pomocí vícekanálového spektrofotometru je optická hustota studovaného materiálu porovnána s optickou hustotou kontrolních vzorků a výsledky jsou matematicky zpracovány. Množství protilátek u pacienta přímo závisí na výšce optické hustoty dané jamky.

Je důležité mít na paměti, že pro každý testovací systém jsou vyvinuty individuální ukazatele, které zohledňují výsledky, ukazatele normy a patologie („referenční hodnoty“). To je třeba vzít v úvahu při hodnocení výsledků každé konkrétní studie.

Je nesprávné interpretovat výsledky jedné laboratoře pomocí „referenčních hodnot“ jiné laboratoře. Nesprávné je také porovnávat výsledky různých laboratoří mezi sebou.

Při hodnocení výsledků u konkrétních infekcí je důležitá třída detekovaných protilátek a jejich množství. To určuje nejen etiologii infekce, ale také očekávané stadium onemocnění (akutní, chronické), jakož i přítomnost aktivní infekce (akutní nebo exacerbace chronické) v době vyšetření.

<strong>Jaký je přibližný časový rámec pro vznik protilátek?</strong>

Nejčasnější protilátky jsou IgM. Mohou být detekovány 1-3 týdny po možné infekci, která charakterizuje akutní fázi infekčního procesu. Druhou situací pro výskyt protilátek IgM je exacerbace chronického procesu. IgM cirkulují v průměru asi 3 měsíce, poté jejich počet postupně mizí. U některých pacientů však mohou být stopová množství IgM detekována 1-2 roky po infekci.

Od 4. týdne po infekci se začínají objevovat IgG protilátky. U většiny infekcí se jejich titr postupně zvyšuje s maximem v různých časech (v průměru po 1,5-2 měsících), pak titr zůstává na nízké úrovni a indikuje imunitu. U některých onemocnění nejsou hladiny IgG vysoké.

<strong>Možnosti detekce protilátek</strong>

• Izolovaná detekce IgM protilátek naznačuje přítomnost primární infekce.
• Současná detekce IgM a IgG v krvi je typická pro primární infekci v předchozích 2-3 měsících, stejně jako během exacerbace chronického onemocnění.
• Detekce IgG v izolaci může indikovat jak imunitu vůči onemocnění, tak chronickou infekci. Ve druhé situaci je důležité jak množství protilátek (titr), tak změna tohoto titru v čase. Typicky se studie provádějí v intervalech 2-4-6 týdnů.

Jednou z metod používaných v diagnostice alergických onemocnění jsou specifické krevní testy na alergeny, které umožňují nejen určit stupeň senzibilizace a typ tělu cizí látky, ale také zjistit její roli při vzniku této alergické choroba.

Co je krevní test na alergeny?

Stanovení alergenu krví je vysoce informativní, absolutně bezpečná diagnostická technika, která se provádí in vitro, to znamená, že nevyžaduje přímou lidskou účast. Tento laboratorní test umožňuje jediným použitím detekovat přítomnost specifických protilátek proti neomezenému počtu alergenů v pacientově séru, plazmě nebo plné krvi. V případě, že při provádění kožních alergických testů existuje možnost vzniku závažné alergické reakce, je taková analýza jedinou možnou metodou diagnostiky.

Všechny laboratorní testy zahrnující použití krve jsou konvenčně rozděleny na specifické a nespecifické. Druhý typ výzkumu, zaměřený na identifikaci obecných změn v imunitním systému pacienta, využívá klinický krevní test, stanovení hladiny C-reaktivního proteinu, charakterizaci imunokompetentních buněk atd.

Specifická diagnostika alergenů zahrnuje stanovení a měření hladiny alergen-specifických imunoglobulinů IgG/IgG4, které jsou biomarkery přecitlivělosti na cizorodé proteiny.

Metody specifické diagnostiky alergií

1. Enzymová imunoanalýza pro stanovení alergenu. Tato studie je předepsána k měření množství specifických imunoglobulinů IgE v krvi pacienta. Normálně se celková hladina imunoglobulinu pohybuje v rozmezí 20–120 jednotek/ml. V přítomnosti alergií je tento práh výrazně zvýšen.
2. Komplexní rozbor potravinových alergenů – stanovení specifických imunoglobulinů IgG4, seskupených do tzv. alergopanelů (skupin potravin), optimálně vybraných pro zkřížené reakce.
3. RAST test (radioalergosorbent). Tento test se používá ke stanovení koncentrace imunoglobulinů IgE a IgG v krvi. S jeho pomocí je zjištěna alergie, ale není stanovena míra citlivosti na cizí protein, který ji způsobuje.
4. Imunofluorescenční analýza na alergeny je v současnosti považována za „zlatý standard“ v diagnostice alergických patologií. Metodou ImmunoCap, která je skutečným kvantitativním testem, se hodnotí koncentrace IgE v krevním séru a zjišťuje se funkční stav organismu. Při provádění studie jsou využívány jednotlivé alergeny (asi 280 ks), panely potravinových a inhalačních alergenů, panely pro stanovení alergenů zvířat, roztočů, trav, hub atd.
5. Test MAST umožňuje identifikovat změny ve funkční aktivitě fagocytů, když interagují se specifickými agens.
6. Imunoblot je vysoce specifická a vysoce citlivá referenční technika, která potvrzuje diagnózu v případě pozitivního nebo neurčitého výsledku ELISA.
7. Imunochromatografická analýza je test na alergeny, který zahrnuje použití speciálních rychlých testů. Tato metoda se používá při studiu séra, plazmy nebo plné krve.

Indikace pro laboratorní vyšetření

• Atopická dermatitida, ekzém, neurodermatitida a další patologické stavy provázené výrazným poškozením kůže.
• Zvýšená citlivost kůže, která může způsobit falešně pozitivní nebo falešně negativní výsledky.
• Nepohodlí při kožních testech.
• Těžký dermografismus (reakce kůže na mechanické podráždění).
• Potřeba neustálého používání antialergických léků, které snižují citlivost na alergeny během kožních testů.
• Dětství.
• Anamnéza anafylaxe nebo pravděpodobnost jejího rozvoje.

Klinika ABC-MEDICINE v Moskvě, která poskytuje širokou škálu ambulantních služeb, zavedla integrovaný přístup k problému diagnostiky a léčby alergií. U nás si můžete udělat krevní test na alergeny, jehož cena závisí na diagnostické metodě, a v případě potřeby také podstoupit kompletní léčbu vyvinutou v souladu s mezinárodními standardy pro léčbu alergických onemocnění závislých na histaminu.

Ceny služeb

Cena je dočasně nedostupná. Ceny se aktualizují. Aktuální ceny si ověřte u operátorů svého call centra. Omlouvám se za způsobené potíže.